PCR基因扩增仪对样品的收集和扩增环节操作要求

来源：上海培清科技有限公司 2019年12月05日 10:09

　　PCR基因扩增仪是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

　　PCR基因扩增仪检测微量感染因子时，操作人员容易因为污染而导致各种问题。SLD中检实验室技术根据多年行业经验，给出的建议是：进行PCR操作时，操作人员一定要严格遵守一些操作规程，大程度地降低可能出现的PCR污染事故的发生。

　　尽管PCR扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应导致的，但样品间的交叉污染也是常见原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应时要谨慎对待，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应谨慎操作，一般需做到以下几点：

　　1、戴一次性手套，若不小心溅上反应液，应立即更换手套;

　　2、避免反应液飞溅，若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;

　　3、使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免空气中气溶胶的污染;

　　4、操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后再分装，这样既可以减少操作次数，避免污染，又可以增加反应的精确度；

　　5、后加入反应模板，加入后盖紧反应管;

　　6、操作时设立空白对照和阴阳性对照，既可验证PCR反应的可靠性，又可

　　以协助判断扩增系统的可信性;

　　7、由于实际操作时加样器很容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，所以操作者应该使用高压处理过的或可替换的加样器。假如没有这种特殊的加样器，至少在PCR操作过程中加样器应该，严禁交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个相邻区域使用;

　　8、重复实验，验证结果，慎下结论。

　　由于PCR实验操作非常专业，在设计PCR基因扩增实验室时设计师也要充分考虑上述技术要求，避免PCR实验室在后续使用时出现返工、返修问题。

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